新闻中心您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 观测绿色荧光蛋白的几种方法你知道么

观测绿色荧光蛋白的几种方法你知道么

发布时间:2022-08-16   点击次数:128次
  绿色荧光蛋白是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。GFP具有多种优点:易于检测,灵敏度高;荧光性质稳定,耐受性强;易于表达,无细胞毒性;可用于活细胞检测。
 
  因此,GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控,或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用,或者靶向标记某些细胞器。
 
  GFP吸收的光谱最大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副吸收峰(蓝光);发射光谱最大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder)。
 
  虽然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于该激发光对细胞的伤害更小,因此通常多使用该波段光源(多为488nm)。
 
  此外,GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下更稳定。
 
  类似的,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。
 
  由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比的。
 
  但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白,比如萤火虫荧光素酶等。
 
  观察GFP荧光蛋白方法有:
 
  采用荧光蛋白观测灯是便捷、方便的观察方法,因GFP在470nm有一个很高的吸收峰,采用 470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光,在观察gfp荧光时,因为激发光为强烈的蓝色光线,必须佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。
 
  2. 紫外光源:
 
  采用紫外光源(又叫紫外线灯、黑光灯)观察也非常方便,但如果观察植物,植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光,对gfp发出的荧光也会产生干扰,另外,标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。
 
  3.荧光显微镜
 
  荧光显微镜(Fluorescence microscope) : 荧光显微镜是以紫外线为光源, 用以照射被检物体,使之发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
 
  荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;
 
  另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
 
  目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察,荧光显微镜在实验室非常普及,但不足是必须采集叶片或动物切片进行观察,对培养的标本进行破坏,无法进行活体观察。
上海路阳仪器有限公司

上海路阳仪器有限公司

地址:上海市松江区新桥镇泗砖南路255弄120号

主营产品:黑光灯,探伤灯,紫外线探伤灯,LED磁粉探伤灯,荧光检漏灯,荧光检漏剂,检漏手电筒,脱脂检测灯

© 2022 版权所有:上海路阳仪器有限公司  备案号:沪ICP备10002130号-7  总访问量:166997  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆

QQ在线客服
联系方式

18917039682

19921813005

86-021-64199903