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紫外交联仪用于Southern印迹杂交

更新时间:2023-04-19   点击次数:503次

紫外交联仪用于Southern印迹杂交

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外交联仪的紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量  。

由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图,或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的特殊要求,还必须掌握DNA分子中基因编码区的大小和位置。有关这类数据资料可应用Southern印迹杂交技术获得。

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern的,Southern印迹杂交故因此而得名。早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后,经毛细管的虹吸作用,转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法;滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜(如APT、ABM纤维素膜)等。利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片断长度多态性分析(RFLP)等。

紫外交联仪为什么有人称为DNA紫外交联仪,核酸紫外交联仪?

紫外交联仪主要用于Northern和Southern印迹杂交实验中将DNA或RNA从凝胶转移到尼龙膜后固膜。

Northern印迹杂交(Northern blot)。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。

DNA是核酸的一种,核酸包括DNA和RNA。核酸的功效与作用是合成蛋白、维持机体免疫反应和抗氧化,核酸是一种生物大分子,在蛋白质的复制和合成中既储存和传递遗传信息的作用,能够维持机体正常的免疫反应,具有一定抗氧化的作用,还能够促进细胞的分化以及影响生物合成,又能够促进身体营养的吸收和利用。

斑点杂交(dot blot)是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜、NC膜)上,用已标记的探针进行杂交,洗膜(除去未接合的探针),放射自显影,判断是否有杂交及其杂交强度,主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。

狭缝斑点杂交(slot blot):也是广义dot blot的一种。圆点的形状因为点很小后期不利于光密度分析,并且孔不易清洗干净。从点杂交角度来说,狭缝与斑点印迹没有区别,只是终印迹形状不同。如果觉得自己样品量不大,担心样品不能填满狭缝其实也不是问题,因为不填满狭缝也不影响杂交结果,多是狭缝长短不整齐,另外,通过稀释样品填满狭缝以后再做杂交,后印迹杂交结果不受影响。

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