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2023荧光蛋白激发观测的新方法

更新时间:2023-04-24   点击次数:450次

绿色荧光蛋白激发观察方法

随着时代科技发展进步,观察荧光蛋白的技术也越来越便捷,传统的荧光显微镜观测荧光蛋白有很多局限性,美国路阳生产的便携式荧光蛋白激发观测灯给转基因研究工作者带来了便捷性,无需取样,打开观测灯直接照射荧光蛋白,肉眼就能清晰看到荧光蛋白在叶片、愈伤、种子、菌落等载体上的表达。无论是绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或红色荧光蛋白,一台观测灯就能直接观测2种荧光蛋白的表达。现工程师针对绿色荧光蛋白的观测原理、几种观测方法介绍如下


绿色荧光蛋白(GFP):

绿色荧光蛋白(GFP),是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色萤光,在细胞生物学与分子生物学中,绿色萤光蛋白(GFP)基因常用做报告基因。绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子)上进行表现,并拿来映证某种假设的实验方法。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达。现在,绿色萤光蛋白(GFP)基因已被导入并表达在许多物种,包括细菌,酵母和其他真菌,鱼(例如斑马鱼),植物,苍蝇,甚至人等哺乳动物的细胞。

GFP吸收的光谱峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副吸收峰(蓝光);发射光谱峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰。虽然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于该激发光对细胞的伤害小,因此通常多使用该波段光源(多为488nm)。GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下稳定。类似的,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此适用于定量测定与分析。由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白比不上的。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白,比如萤火虫荧光素酶等。

由于荧光蛋白能稳定在后代遗传,并且能根据启动子特异性地表达,在需要定量或其他实验中慢慢取代了传统的化学染料。更多地,荧光蛋白被改造成了不同的新工具,既提供了解决问题的新思路,也可能带来更多有价值的新问题。

绿色荧光蛋白的激发观察方法

1. 紫外光源
采用LUYOR-3410UV便携式紫外光源(又叫高强度紫外线灯、黑光灯)观察也非常方便,但如果观察植物,植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光,对gfp发出的荧光也会产生干扰,另外,标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。

便携式GFP激发光源
采用LUYOR-3415RG便携式GFP激发光源(又叫荧光蛋白观测镜、荧光蛋白激发观测灯)是便捷、方便的观察方法,因GFP在470nm有一个很高的吸收峰,采用 470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光,在观察gfp荧光时,因为激发光为强烈的蓝色光线,佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。

GFP烟草表达效果图.jpg


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