LUYOR-3415RG在玉米转化体筛选中的作用
玉米广泛分布于全国各地，是我国重要的粮食、饲料和工业作物之一，种植面积和产量均居前列。玉米喜温暖、光照充足的环境，适宜在土层深厚、排水良好的中性或微酸性壤土中生长。作为耐旱能力较强的作物之一，具有较高的适应性和栽培灵活性。
中国农科院在《Journal of Integrative Plant Biology》期刊发表文献《Development of cytosine and adenine base editors for maize precision breeding》，文献中指出LUYOR-3415RG 荧光手电筒作为核心检测工具，在基于种子荧光报告系统（SFR）的玉米转化体筛选中发挥了关键作用。研究构建的 SFR 系统包含胚乳特异性红色荧光蛋（DsRED）表达 cassette（EnSFR）和胚胎特异性绿色荧光蛋白（eGFP）表达 cassette（EmSFR），通过 LUYOR-3425RG 的特定激发波长可快速区分不同转化载体的种子。
为了实现快速筛选，我们将玉米的SFR系统（Dong等人，2018）整合到新型CBEs中。具体而言，我们开发玉米精种的稳健基础编辑器。研究人员在多种CBE载体中分别插入了靶向胚乳的红色荧光蛋白表达盒（EnSFR）和靶向胚胎的绿色荧光蛋白表达盒（EmSFR）（图2A、S2 )，从而筛选出不同的转化载体（图2 B）。玉米转化实验采用农杆菌介导的传递法完成。最终共获 得47个T0代转基因事件。使用LUYOR-3415RG激发波长为480和550纳米，根据荧光特性对种子进行分类。在胚乳特异性启动子调控下表达DsRED的 种子，在550纳米波长下呈现红色荧光。相比之下，那些受胚胎特异性调控的种子则表现不同。
启动子驱动的eGFP表达在480纳米波长下呈现绿色荧光（图2 B）。我们鉴定出24株携带CBE-A的转化体、14株携带CBE-C 的转化体以及9株同时携带CBE-A和CBE-C的转化体。此外，还鉴定出9株携带CBE-F的转化体、8株携带CBE-R的转化体和 4株同时携带CBE-F与CBE-R的转化体（图2C）。通过使用针 对不同胞嘧啶脱氨酶的特异性分子标记进行验证，结果与荧光 检测法的鉴定结果一致（图S3）。这种SFR系统的整合显著提升了生物效应载体（BEs）筛选的稳健性和效率，在研发及应用中具有重要价值。
LUYOR-3415RG 通过特异性激发双荧光标记，成为连接载体构建、转化体筛选与后代验证的关键技术环节，为高效开发玉米碱基编辑工具和抗除草剂突变体提供了重要支撑。同时该研究也证实，LUYOR-3415RG便携式荧光蛋白激发光源能够观察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的表达。
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