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3415荧光蛋白激发光源区分平板上未编辑的和假定的编辑的菌落转化子

发布时间:2022-09-20   点击次数:198次

近日,中国科学院天津工业生物技术研究所在《applied microbiology and biotechnology》期刊发表文献,文献中指出利用LUYOR-3415荧光蛋白激发光源进行筛选。下面是文献摘要,文献全文链接在网页尾部

CRISPR/Cas9系统是一种强大的基因组编辑工具,目前已在一些丝状真菌中成功应用。但Cas9蛋白对真菌细胞存在的潜在毒性在一定程度上限制了该体系的进一步推广和应用。AMA1是一种来源于构巢曲霉的自我复制因子,它的衍生载体在没有抗性选择的情况下很容易丢失。本研究中,我们利用基于AMA1的Cas9表达载体在无抗筛选条件下的*丢失的特性,消除了Cas9对威尼斯镰刀菌TB01的毒性。同时,挖掘了两个可用的用于CRISPR/Cas9系统sgRNA表达的内源性Pol III启动子(FvU6374和Fv5SrRNA)。与FvU6374(40-50%)相比,Fv5SrRNA具有更高的单基因编辑效率(> 85%),使用Fv5SrRNA同时编辑两个基因的效率超过75%。利用上述建立的基因编辑系统,我们删除了一个编码丁二醇脱氢酶的基因FvBDH,获得的突变体菌株乙醇产量比野生型提高了52%。本研究开发的高效CRISPR/Cas9系统为后期通过代谢工程推进威尼斯镰刀菌TB01的发展奠定了技术基础;同时,未来通过进一步的遗传改造和发酵工艺优化后,获得的FvBDH基因编辑转化子有望用于菌丝蛋白和乙醇的同步生产。

 

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   通过荧光观察,初步筛选了GFP基因编辑的变异体。使用手持荧光蛋白激发光源LUYOR-3415区分平板上未编辑的(荧光)和假定的编辑的(无荧光)菌落转化子。转化板被放置在一个黑暗的环境中。然后,打开激发波长分别为450 nm和500 nm的绿色荧光树脂激发光源,照亮平板观察或拍摄菌落转化子

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   LUYOR-3415RG便携式荧光蛋白激发光源能够观察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的表达,我公司针对科研院所免费试用,试用满意付款。我们在北京、哈尔滨、武汉、郑州、海口设有代理商,如需演示,请和我们当地代理商联系。

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